摘要
研究背景
虽然中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）和血小板与淋巴细胞比值（PLR）一直作为癌症和炎症疾病的预后标志物，但是把其作为患有急性胰腺炎猫狗的衡量标准的研究目前比较匮乏。研究目的
在猫狗身上，评估NLR和PLR作为急性胰腺炎严重程度和临床过程的生物标志物的有用性。研究方法
在这项前瞻的性研究中，研究对象为67只患有急性胰腺炎的狗和41只患有急性胰腺炎的猫，17只健康的狗和猫作为参照对象。同时把患有急性胰腺炎的猫狗的NLR和PLR同对照组进行了比对。研究过程中，疾病的严重程度采用改良的人类“急性胰腺炎严重程度床边指数（BISAP）”评分进行划分，病程按照临床恢复时间来判定。研究结果
经过研究发现，患有胰腺炎的猫狗的NLR和PLR显著高于健康对照组。然而，经过改良的BISAP评分的评估，未发现NLR或PLR与疾病严重程度之有显著关系。研究还发现患有胰腺炎且恢复期延长的猫狗的PLR显著增加，患有胰腺炎且恢复期延长的猫NLR也显著增加。研究结论
通过研究我们得出结论：NLR和PLR的增加可以提供有关猫狗胰腺炎病程的信息。一
引言
预后标志物就像一个可以用于估计疾病病程和结果的临床症状或者可测量的患者参数一样是特有的。在文献中，中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）和血小板与淋巴细胞比值（PLR）一直被描述为预后标志物。在人类有关癌症和炎症过程的病例中，可以发现有关这两种比值的研究。在炎症反应病例中，有好几项测量这些比值的研究证明了这些参数的预后价值。这些比值与疾病结果或预后之间的相关性是以这些不同的炎症细胞在产生和分泌各种细胞因子和生长因子的重要性为基础的,而细胞因子和生长因子影响炎症过程，从而影响临床结果。由于急性胰腺炎是一种严重的炎症过程，在这个过程当中预后标志物是很重要的，因此，研究人员对人类胰腺炎患者的NLR和PLR进行了研究，并将这两种比值同疾病的严重程度和临床结果进行了比较。研究结果表明，相对于PLR而言，NLR更能提供人类急性胰腺炎患者的预后信息。在兽医学方面，一些对患有脓*性腹膜炎或全身炎症反应综合症（SIRS）的狗进行的研究就是围绕NLR进行的。他们比较了患有败血症、非过敏性系统炎症性疾病和对照组的狗的NLR。关于使用NLR作为狗的严重炎症过程的预后标志物的结论是不同的。一项研究得出结论，对于SIRS而言，NLR是一个有的标志物，而有一项研究得出结论，NLR在诊断和预测全身炎症过程方面的应用有限。因此，尤其是在兽医学方面，有必要对这两种比值进行更多的研究。又因为急性胰腺炎是猫狗常患的一种严重的炎症性疾病，而预测临床结果是临床护理的重要组成部分，所以，我们决定研究患有急性胰腺炎的猫狗的NLR和PLR。本研究的目的是测量患有急性胰腺炎的猫狗的NLR和PLR，并确定这些比值是否提供了有关疾病严重程度和病程的相关信息。
二
研究材料和研究方法
2.1动物
本研究共涉及84只狗和58只猫。所有动物都是德国歌廷根大学兽医医学研究所小动物诊所的病人，并且这些动物被分成两组。
第一组（n=67只狗和n=41只猫）的小动物都患有急性胰腺炎。急性胰腺炎的诊断是基于食欲不振、腹痛、呕吐和经酶联免疫吸附测定（ELISA）（SNAP）的犬科动物和猫科动物c/fPL的升高以及1,2-0-二氟甲酰基-rac-甘油-戊二酸-（6’-甲基间苯二酚）（DGGR）脂肪酸浓度升高这样的临床症状。此外，由一名经验丰富的内科专家对所有动物进行超声波检查。胰腺炎的主要症状包括胰腺增大或形状不规则、实质回声减弱、周围脂肪回声增强。根据临床结果第一组分为两个子小组：恢复期延长组和短暂恢复期组。截止日期设定为十天。所有经证实患有急性胰腺炎的动物均采用相同的治疗方案，主要是以输液、镇痛药（吗啡和／或安乃近）以及抗生素（阿莫西林）为基础进行治疗的。治疗期间，定期检查临床体征和实验室参数。在参考间隔内无典型临床症状、c/fPL以及DGGR脂肪酶水平正常被认定为恢复良好。所有调查和治疗均证实符合《德国动物福利法》。
第二组（n=17只狗和17只猫）的动物为对照组，是由一些没有表现出临床症状或实验室参数表明没有患急性胰腺炎或其他炎症或肿瘤疾病的动物组成。所有第二组的猫和狗都来诊所进行过常规疫苗接种。且对这些动物进行了临床和血液（血液学、临床生物化学、c/fPL以及DGGR脂肪酶）检查和腹部超声波检查。
2.2样本
在任何治疗前和治疗期间，患者在入院时从头静脉采集血样。为了获得血液学参数，采集血样时使用EDTA管（德国公司Numbercht.SarstedtAGCo生产），并使用ProCyte血液分析仪（美国缅因州韦斯特布鲁克IDEXX实验室有限公司设计研发）进行分析。
用血清管收集临床化学所需的血清样本，并使用Eppendorf离心机（德国汉堡EppendorfAG研发）以g离心5分钟。使用临床化学分析仪（Konelab20i；产于德国公司ThermoFischerScientificInc,Dreieich）以及商用套件对DGGR脂肪酶以及其它的临床生物化学参数进行分析。按照制造商的说明，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）（SNAP实验；美国缅因州韦斯特布鲁克IDEXX实验室有限公司设计研发）测定c/fPL。NLR和PLR比值分别定义为中性粒细胞绝对计数与淋巴细胞绝对计数的比值和血小板绝对计数与淋巴细胞绝对计数的比值。
在这项研究中，疾病的严重程度采用改良的“急性胰腺炎严重程度床边指数（BISAP）”评分进行测量。该指数用于人类医学，包括尿素浓度、精神状态、SIRS症状、年龄和腹腔积液的出现。因为这种症状在患有胰腺炎的猫狗身上很少见，所以我们通过排除腹腔积液来修改这个指数。尿素浓度超过50ml/dL参照上线的狗和猫得1分。受干扰的一般行为也得1分。出现以下三种或三种以上症状:呼吸急促(狗20/分钟；猫40/分钟)，心跳过速（狗/分钟，猫/分钟）、白细胞增多或白细胞减少、增加的带中性粒细胞分数（狗3%；猫5%）和发热（狗39.2°c；猫39.7°c）或者体温过低（狗38.1°c;猫37.8°c）都高度提示SIRS，并且也得1分。对于这两种物种而言，年龄大于十岁得1分。对所有分数进行累加，3-4分表示死亡风险增加，小于3分表示死亡风险降低。对于每只动物进行至少为期30天的病程观察。那些在10天内可以恢复的动物可以认定为恢复良好。在观察期内死亡或被安乐死或者恢复期超过10天的动物被认定为恢复不良。
2.3统计数据
使用商用统计程序Prism8(GraphPad软件)进行统计分析。将群体分布与Kolmogorov-Smirnov检验进行比较。非正态分布结果与Mann-WhitneyU检验进行比较。同时计算了NLR或PLR的比值与胰腺炎的存在、疾病严重程度和病程之间的相关性。在P.05时，差异被认为是显著的。
三
研究结果
患急性胰腺炎这一组的狗是由31只雌性和36只雄性组成的，平均年龄为十一岁（年龄范围为5-18岁）。其中39只纯种犬，28只混合犬。所有第一组的狗都呈现出与急性胰腺炎一致的临床症状，并且在进行超声波检查时，大多数（58/67）也表现出典型的胰腺炎症状。在所有病历里，cPL结果与胰腺炎一致，并且所有病例的DGGR脂肪酶水平都超过了参照上线（U/L）（DGGR脂肪酶水平从U/L到U/L范围变化，中值[MV]为U/L；见图1）。
图1显示患有胰腺炎和健康对照组狗的1,2-0-二氟甲酰基-rac-甘油-戊二酸-（6’-甲基间苯二酚）（DGGR）脂肪酸浓度。两组之间差异显著（P0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
67只患有急性胰腺炎的狗和17只来自于健康对照组的狗都被纳入本研究中。研究发现，患有急性胰腺炎狗的白细胞计数（最小3./ul；最大34./ul；中值10./ul）同健康对照组的狗的白细胞计数（最小4./ul；最大14./ul；中值9./ul）并没有显著差异（P=0.51）。研究还发现患有胰腺炎的狗的中性粒细胞（最小2./ul；最大22./ul；中值7./ul）与健康狗的中性粒细胞（最小/ul；最大12./ul；中值6./ul）也没有显著差异（P=0.1），最后，患有胰腺炎的狗的淋巴细胞水平（最小/ul；最大4./ul；中值1./ul）同健康狗的淋巴细胞水平（最小1./ul；最大3./ul；中值2./ul）没有显著差异（P=0.07）。然而,在血小板水平方面，健康狗（最小99./ul；最大./ul；中值./ul）同急性胰腺炎的狗（最小59./ul；最大./ul；中值./ul）却存在显著差异（P=0.02）。第一组的犬（最小1；最大34；中值6）和第二组的犬（最小1；最大10；中值3）在NLR比值方面的差异显著（P=0.）。第一组的犬（最小81；最大；中值）和第二组的犬（最小25；最大；中值）在PLR比值方面的差异也比较显著（P=0.）（见图2和图3）。
图2显示患有胰腺炎和健康对照组狗的中性粒细胞与淋巴细胞的比值（NLR）。两组之间NLR差异显著（P=0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
图3显示患有胰腺炎和健康对照组狗的血小板与淋巴细胞的比值（PLR）。两组之间差异显著（P=0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
有明显重症胰腺炎症状(BISAP3-4)的狗在白细胞计数、NLR或PLR比值方面与对照组没有显著差异（P均0.05）。
除PLR以外，恢复时间短的狗（小于10天）（n=41）和恢复时间延长的狗(大于10天)(n=26)在任何可以测量或可以计算的参数上均无显著差异。恢复时间短的这一组的白细胞(最小3./ul;最大15./ul;中值10./ul)与恢复时间延长的这一组的白细胞(最小5./ul;最大34./ul;中值12./ul)无显著差异（P=0.69）。恢复时间短的这一组的中性粒细胞(最小2./ul;最大13./ul;中值7./ul)与恢复时间延长的这一组的中性粒细胞(最小3./ul;最大22./ul;中值8./ul)无显著差异（P=0.56）。恢复时间短的这一组的淋巴细胞(最小/ul;最大4./ul;中值1./ul)与恢复时间延长的这一组的淋巴细胞(最小/ul;最大2./ul;中值1./ul)无显著差异（P=0.08）。恢复时间短的这一组的血小板(最小59./ul;最大./ul;中值./ul)与恢复时间延长的这一组的血小板(最小./ul;最大./ul;中值./ul)无显著差异（P=0.31）。恢复时间短的这一组的NLR(最小1;最大14;中值4)与恢复时间延长的这一组的NLR(最小1;最大34;中值7)无显著差异（P=0.07）。最后，恢复时间短的这一组的PLR(最小81;最大;中值)与恢复时间延长的这一组的PLR(最小;最大;中值)差异显著（P=0.01）（见图4和图5）。
图4显示恢复期短的（小于10天）以及恢复期长（大于10天）的患有胰腺炎的狗的中性粒细胞与淋巴细胞的比值（NLR）。两组之间的NLR比值无显著差异（P=0.07）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
图5显示恢复期短的（小于10天）以及恢复期长（大于10天）的患有胰腺炎的狗的血小板与淋巴细胞的比值（PLR）。两组之间的PLR比值存在显著差异（两者的P=0.01）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
41只患胰腺炎的猫包括16只雌性和25只雄性，平均年龄为13岁（年龄范围为10-19岁）。虽然有7只属于纯种猫，但是几乎所有的都属于家养的短毛猫（n=34）。所有患病的猫都出现了厌食、腹痛和呕吐这样的临床症状，并且几乎所有的病例（36/41），都经超声波检查证实患有胰腺炎。
所有病例的fPL结果都与胰腺炎一致，并且所有病例的DGGR脂肪酶水平都超过了参照上线（26U/L），DGGR脂肪酶水平从28U/L到U/L范围变化，中值[MV]为50U/L（见图6）。
图6显示患有胰腺炎和健康对照组猫的1,2-0-二氟甲酰基-rac-甘油-戊二酸-（6’-甲基间苯二酚）（DGGR）脂肪酸浓度。两组之间的差异显著（P0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
本次研究对身患急性胰腺炎的猫（n=41）和健康对照组猫（n=17）的白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞以及血小板数量进行了比对。身患急性胰腺炎的猫的白细胞计数(最小2./ul;最大34./ul;中值10./ul)与健康对照组猫的白细胞计数(最小3./ul;最大13./ul;中值8./ul)并没有显著差异（P=0.25）。身患胰腺炎的猫的中性粒细胞计数(最小/ul;最大29./ul;中值8./ul)与健康对照组猫的中性粒细胞计数(最小1./ul;最大14./ul;中值5./ul)也没有显著差异（P=.65），最后一点，身患胰腺炎的猫的血小板水平(最小20./ul;最大./ul;中值./ul)与健康对照组猫的血小板水平(最小./ul;最大./ul;中值./ul)没有显示显著性差异（P=0.31）。然而，健康对照组猫的淋巴细胞水平(最小/ul;最大4./ul;中值2./ul)与身患急性胰腺炎的猫的淋巴细胞水平(最小/ul;最大12./ul;中值2./ul)差异明显（P=0.）。第一组的NLR比值(最小1;最大36;中值5)同第二组的NLR比值(最小1;最大8;中值1.5)差异明显（P=.）（见图7）。第一组的PLR比值(最小22;最大;中值)同第二组的PLR比值(最小29;最大;中值)也表现出很大的差异（P=0.03）（见图8）。
图7显示患有胰腺炎和健康对照组猫的中性粒细胞与淋巴细胞的比值（NLR）。两组之间NLR差异显著（P=0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
图8显示患有胰腺炎和健康对照组猫的血小板与淋巴细胞的比值（PLR）。两组之间差异显著（P=0.03）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
研究还发现，身患重症胰腺炎的猫(BISAP3-4)与身患轻度胰腺炎的猫(BISAP3)在白细胞计数、NLR比值或者PLR比值方面无显著差异（P均0.05）。
就白细胞(P=0.25)、中性粒细胞(P=0.65)和血小板(P=0.31)而言，恢复期短的猫(小于10天)（n=9）同恢复期延长的猫(大于10天)（n=32）没有显著差异。相比之下，这两组猫的淋巴细胞(P=0.)、NLR(P=0.)和PLR(P=0.03)比值却存在显著差异(见图9和图10)。
图9显示恢复期短的（小于10天）以及恢复期长（大于10天）的患有胰腺炎的猫的中性粒细胞与淋巴细胞的比值（NLR）。两组之间无显著差异（P=0.）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
图10显示恢复期短的（小于10天）以及恢复期长（大于10天）的患有胰腺炎的猫的血小板与淋巴细胞的比值（PLR）。两组之间存在显著性差异（P=0.03）。一个显示最小值、最大值和中间值的箱线图。
具体来说，恢复期短的这一组的白细胞数(最小6./ul;最大18./ul;中值10./ul)与恢复期延长的这一组的白细胞数(最小2./ul;最大13./ul;中值8./ul)无显著差异(P=0.25)。恢复期短的这一组的中性粒细胞数(最小4./ul;最大11./ul;中值7./ul)与恢复期延长的这一组的中性粒细胞数(最小/ul;最大12/ul;中值3./ul)无显著差异(P=.65)。恢复期短的这一组的血小板计数(最小20./ul;最大./ul;中值./ul)与恢复期延长的这一组的中性粒细胞数(最小./ul;最大./ul;中值./ul)无显著差异(P=0.31)。而恢复期短的这一组的淋巴细胞计数(最小/ul;最大12./ul;中值3./ul)与恢复期延长的这一组的淋巴细胞计数(最小/ul;最大7./ul;中值1./ul)差异显著(P=0.)。恢复期短的这一组的NLR比值(最小1;最大5；中值2)与恢复期延长的这一组的NLR比值(最小1;最大36;中值6)差异显著(P=0.)。最后，恢复期短的这一组的PLR比值(最小22;最大；中值94)与恢复期延长的这一组的PLR比值(最小33;最大;中值28)差异显著(P=0.03)。
四
讨论
急性胰腺炎是猫狗常患的一种常见的炎症性疾病。关于这种疾病的不同形式已有很多描述，其中急性型和致死型具有特别的临床意义，这是因为强化治疗和护理对于成功治疗这些动物至关重要。猫狗急性胰腺炎的临床症状包括食欲不振或者厌食、呕吐以及腹痛。相关的多器官功能障碍可能是胰腺坏死的后果，很多案例中，这一情况可能导致更严重的临床症状，例如SIRS，甚至死亡。为了研究NLR或者PLR比值是否可以作为疾病严重程度或病程的标志从而作为预测的基础，我们把患有胰腺炎的猫和狗作为研究对象进行了观察研究。
在人类医学中，急性胰腺炎最常见于六十岁以上的人群。在这项研究中，我们证实了老年猫狗患胰腺炎的频率更高；并且患胰腺炎的狗的平均年龄为十一岁，患胰腺炎的猫的平均年龄为十三岁。
在许多病例中，犬科动物和猫科动物急性胰腺炎的典型临床症状有食欲不振、呕吐和腹泻。在研究中，所有第一组的动物都表现出了这些急性胰腺炎的临床症状。但是，由于临床症状不很明确，诊断通过IDDEXXSNAP对于c/fPL的测定以及升高的DGGR脂肪酶水平才得以证实。SNAPcPL的敏感性和特异性分别为82%和59%。在身患胰腺炎的狗身上，犬DGGR脂肪酶也出现了93%的敏感性和53%的特异性。在猫身上，SNAPfPLI和DGGR脂肪酶这两项测试都用于诊断猫胰腺炎。在身患胰腺炎的猫身上，DGGR脂肪酶的敏感性和特定性分别为48%和63%。对于身患胰腺炎的猫而言，SNAPfPL测定同IDEXXSpecfPL测定的一致性为90%-97.5%，反过来，IDEXXSpecfPL测定的敏感性和特异性分别为79%和80%。
由于两种诊断实验都具有高度的敏感性和中等程度的特异性，因此，我们在研究中将腹部超声波检查作为一种附加的诊断工具。虽然并非所有疑似胰腺炎病例都显示典型的超声改变，但大多数具有典型临床症状、升高的SNAPc/fPL和DGGR脂肪酶的病例都可以通过超声波检查得到确诊。在犬科动物和猫科动物急性胰腺炎的的病例中，先前已经对超声波检查的诊断价值作了研究，并且发现犬和猫的敏感性分别为68%和67%。
因为在一些病例中，严重器官功能障碍患者的急性胰腺炎预后较差，而一些患有急性非致命性胰腺炎的案例治疗成功，所以能提供疾病严重程度以及潜在后果的生物标志物就具有临床意义。
在这项研究中，我们评估了NLR和PLR的预后价值，并研究了它们与急性胰腺炎严重程度和病程的关系。虽然已有研究专门针对患有肿瘤性疾病的小动物的NLR和PLR做过相关调查，但只有几个出版物讨论了它们与炎症性疾病的关系。最近有两项针对患有SIRS和脓*性腹膜炎的狗的NLR进行的研究。并且两项研究均发现炎症过程中NLR升高，但未发现其与疾病严重程度或病程相关。我们的研究结果证实，与健康对照组进行比较，患有胰腺炎的猫狗的NLR增加。
在人类医学方面，胰腺炎的严重程度可以使用不同的评分系统进行评估。在兽医学中，有关于猫狗急性胰腺炎的评分系统的相关描述。我们将NLR比值与改良的BISAP评分系统进行了比较，该评分系统以血尿素氮、精神状态受损，年龄和全身炎症反应（SIRS）这些体征为基础。而之所以选择BISAP评分系统，就是因为所有参数都是常规检查的一部分。相比之下，其他针对狗和猫的评估评分系统却包括乳酸、血氧饱和度或者离子钙这些需要特殊设备和程序的参数。在评分时，我们没有包含腹腔积液这一参数是因为该参数在患有胰腺炎的狗和猫身上没有常规描述。在一项涉及21只患有胰腺炎的狗的研究中，14%的狗在检查时发现腹腔积液。我们的研究结果表明，在猫狗身上，NLR和BISAP之间没有显著的相关性，并且NLR和使用BISAP评定的疾病严重程度之间也没有显著的相关性。
研究还发现，恢复期短的患有急性胰腺炎的狗NLR同恢复期延长的患有急性胰腺炎的狗NLR没有差异。相比之下，恢复期延长的患有急性胰腺炎的猫的NLR却大幅增加，所以支持使用NLR作为猫的预后标志物。
在一项专门针对患有不同疾病，包括炎症的狗进行的PLR的研究中，未发现PLR与疾病严重程度和病程之间的关系。在我们的研究中，同健康的猫狗比起来，患有急性胰腺炎的猫狗的PLR显著增加。不幸的是，在这两个物种中，都没有发现PLR和BISAP评分之间的显著相关性。由于PLR受血小板升高的影响，我们主要将失配归因于BISAP测量的参数，而这些参数不受血小板的影响，如白细胞计数、条带数或者临床参数，如温度。未来的研究适合将PLR和NLR与其他评分系统进行比较。
对于患有急性胰腺炎和恢复期延长的猫狗，PLR显著升高。患病期间PLR的升高主要是血小板增多，而非淋巴细胞减少的结果。血小板在炎症和感染中的作用是众所周知的，它们执行吞噬功能并调节白细胞，这就解释了急性胰腺炎病例中PRL升高的原因。然而，仅血小板计数提供的信息较少。
当然，该研究还有一些局限性。虽然组织病理学检查可能增加胰腺炎诊断的可能性，但在研究中，胰腺炎的诊断仅基于临床和临床病理参数。最近一项研究比较了72只狗的组织病理学结果和胰腺脂肪酶免疫反应性，并且计算出胰腺脂肪酶免疫反应性的敏感性为90%，特异性为92%。
第二个局限性是安乃近的使用，安乃近在研究中用于疼痛治疗,可能由于其抗炎作用而对骨髓产生影响。虽然在文献中，未发现安乃近对犬科动物和猫科动物骨髓影响的研究。但在人类医学中，安乃近过量可以造成白细胞减少和淋巴细胞减少的症状。为了排除抗炎药的影响，进一步的研究建议使用阿片类药物作为镇痛剂。
最后，一些胰腺外疾病，特别是肠道疾病，可能与c/fPL浓度升高有关。例如，在患有炎症性肠道疾病的狗身上，就出现了cPL升高的现象。为了减少这一局限性，除了c/fPL，我们还研究了DGGR脂肪酶，并进行了腹部超声波检查。然而，在进一步的研究中，最好进行肠道活组织检查。
总之，这项研究的结果表明，与健康对照组对比起来，患有急性胰腺炎的猫狗NLR和PLR升高。通过BISAP评分评估的疾病严重程度无法通过猫狗升高的NLR和PLR比值来确认；然而，在猫和狗身上，同NLR的升高相比，PLR的升高与胰腺炎病程延长相关。
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